1. B细胞培养在多大的孔板中培养？
在96孔板进行培养[1]。
2.孔板中每个孔有多少个B细胞？
根据每个细胞生长情况不同，细胞个数在几百到上千个不等。
3.动物如果对抗原产生过度免疫反应怎么办？
调整抗原的剂量和免疫频率，使用合适的免疫佐剂，并监测动物的免疫反应以确保其健康。
4.杂交瘤细胞融合效率低。
优化融合条件，考虑使用不同的杂交瘤细胞系，或尝试其他融合方法。
5.单个B细胞筛选后，抗体是如何组装的，如何设计它的重链和轻链引物？
分别从单个B细胞中扩出抗体的重轻链基因，共表达转染细胞。引物可以通过germline基因序列来设计[2]。
6.单克隆细胞稳定性差怎么办？
定期检测单克隆细胞的稳定性，选择稳定的单克隆细胞进行扩增和抗体生产。
7.抗体样品可能受到污染或包含杂质。
使用适当的纯化技术，例如亲和层析或凝胶过滤，以提高抗体样品的纯度。
8.B细胞大概培养多久可以用于ELISA检测，抗体量会达到多少？
B细胞培养10-12天可用于ELISA检测，抗体量在0.2 μg/mL ~ >10 μg/mL。
9.单个B细胞技术会成为治疗性抗体开发的金标准吗？
虽然单个B细胞技术逐渐成为抗体开发的主流技术之一，但是抗体开发的技术路线仍然有很多种，如杂交瘤和噬菌体展示等，这些方法各有优缺点，相互之间是互补关系[3]。
10.单个B细胞直接裂解后与培养后的PCR成功率哪个更高？
单个B细胞培养后的PCR成功率更高。培养后的B细胞经过扩增，细胞数增加，模板量更高。
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参考文献
[1] Tan S H , Young D , Elsamanoudi S ,et al.Abstract 2565: Detection of ETV1 expression in human prostate tissue specimens using a novel and highly specific rabbit monoclonal antibody[C]//Proceedings: AACR Annual Meeting 2021; April 10-15, 2021 and May 17-21, 2021; Philadelphia, PA.2021.DOI:10.1158/1538-7445.AM2021-2565.
[2] Wallace J L , Arfors K E , Mcknight G W .A monoclonal antibody against the CD18 leukocyte adhesion molecule prevents indomethacin-induced gastric damage in the rabbit[J].Gastroenterology, 1991, 100(4):878-883.DOI:10.1016/0016-5085(91)90259-N.
[3] Powell, William C ,Hicks,et al.A new rabbit monoclonal antibody (4B5) for the immunohistochemical (IHC) determination of the HER2 status in breast cancer: comparison with CB11, fluorescence in situ hybridization (FISH), and interlaboratory reproducibility.[J].Appl Immunohistochem Mol Morphol, 2008,15(5):510-1. DOI:10.1097/PAI.0b013e31802ced25.