【卡梅德生物】抗体发现：单B细胞抗体制备

1.单个B细胞抗体制备技术的原理

? ? ? ? ??单个B细胞抗体技术作为新一代抗体开发技术，可以从单个B细胞中高效、快速的分离抗体，是继杂交瘤、噬菌体展示后又一抗体产生技术的突破。单个B细胞抗体技术根据每个B细胞只含有一个功能性重链可变区DNA序列和一个轻链可变区DNA序列且只产生一种特异性抗体的特性，从动物的淋巴组织中收集B细胞，通过单克隆化技术从单个抗体分泌B细胞中扩增重链和轻链可变区基因，从而将收集到的B细胞扩增成单一来源的克隆群[1]。然后选择抗体生产宿主，在哺乳动物细胞内表达获得具有生物活性的单克隆抗体。单B细胞技术具有高特异性、高活性和高亲和力等突出优势。目前，单B细胞技术制备的抗体在生物医学研究、诊断工具和治疗药物研发等方面有广泛应用[2,3]。

图1： 使用游离蛋白合成形成抗原结合片段的单B细胞快速单克隆抗体筛选方法[2]

2.单个B细胞抗体制备流程

①动物免疫、PBMC分离。选择兔子作为实验动物，并通过注射目标抗原（通常是目标蛋白或多肽）来激发免疫反应，免疫兔子4-5次，以此激活兔子的免疫系统，导致B细胞产生抗体。然后进行ELISA效价测定、免疫兔子外周血采集和PBMC分离。

②流式分选。用PBMC流式分选方法来分选抗原特异性的单个B细胞。

③单B细胞培养筛选。将分选的单个B细胞先在体外进行5~20板96孔板单B细胞培养，然后将细胞培养的上清进行ELISA筛选或者FACS等前期介入检测。

④阳性克隆测序。挑选检测的至少20个阳性细胞克隆进行RT-PCR，来扩增其抗体可变区基因，然后进行测序。

⑤载体构建、抗体表达纯化。最后进行抗体的哺乳表达载体构建、细胞转染和ELISA验证。

图2：单个B细胞抗体制备流程图（卡梅德生物科技（天津）有限公司 ）

3.单B细胞单抗制备优势

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? ? ? ?单B细胞技术能够根据B细胞的特性快速制备单克隆抗体，直接获取完整的单一来源抗体，该方法不限种属、效率高、特异性高、抗体亲和力高、可成药性高、基因多样性好且具有全天然源性，并且能够直接获得抗体基因序列。

4.单个B细胞抗体制备技术应用

? ? ? ?抗病毒治疗应用：单个B细胞抗体技术能人体血液中分选的单个B细胞，快速鉴定和表达抗体基因，特别是对于新型病毒的治疗和预防有很大帮助。全球已有6390万人感染HIV，通过单B细胞技术已获得5种抗HIV包膜蛋白的抗体正在临床I/II期实验中进行评价。

? ? ?神经性疾病治疗应用：偏头痛药物Vyepti是由单B细胞技术制备的兔抗体药物，靶向结合降钙素相关基因肽（CGRP）配体，阻断其对受体的结合作用。此外，该公司的另一种偏头疼药物ALD1910正处于临床前研究阶段。

? ? ? 免疫疾病治疗应用：单个B细胞抗体制备技术在自身免疫性疾病和其他免疫系统疾病治疗抗体研究方面有良好的应用前景。

5. 卡梅德生物能提供的服务及优势

? ? ?卡梅德生物拥有丰富的经验积累、严格的质控体系，提供的单B细胞单抗制备服务的周期短、不限种属、可获得抗体序列，得到的抗体具有更高的特异性和亲和力。为了满足客户的不同需求，卡梅德生物能够提供从抗原设计，合成与修饰，到动物免疫，噬菌体文库构建与筛选，下游抗体修饰与应用鉴定等一站式技术服务。

参考文献

[1]Chi X, Yu C, Chen W, et al. Single B cell monoclonal antibody technologies and applications单个B细胞抗体制备技术及应用[J]. 生物工程学报, 2012, 28(6): 651-660.

[2] Ojima-Kato, T., Nagai, S. & Nakano, H. Ecobody technology: rapid monoclonal antibody screening method from single B cells using cell-free protein synthesis for antigen-binding fragment formation. Sci Rep 7, 13979 (2017). https://doi.org/10.1038/s41598-017-14277-0

[3] Ojima-Kato T, Morishita S, Uchida Y, Nagai S, Kojima T, Nakano H. Rapid Generation of Monoclonal Antibodies from Single B Cells by Ecobody Technology. Antibodies. 2018; 7(4):38. https://doi.org/10.3390/antib7040038