【卡梅德生物】基因编辑技术：CRISPER-CAS9 技术

? ? ? ??作为研究最为深入的基因编辑CRISPR/Cas技术，主要包括sgRNA（single-guide RNA）和Cas9蛋白两个作用元件，可以实现基因定点的精确编辑。sgRNA引导Cas9蛋白识别基因组特定位点，精确剪切待编辑的生物体基因组，导致双链断裂（DSB, double strand break），生物体随后利用非同源末端连接（NHEJ）或同源重组修复（HDR）对双链断裂进行修复。

CRISPR-Cas9的基因编辑方法：

? ? ? ?与基于核酸内切酶另外两代基因编辑技术类似，CRISRP/Cas9基因编辑技术主要分为两个过程。首先，Cas9蛋白特异性切割目标DNA序列，使得DNA双链断裂；然后，生物体内的DNA修复系统修复双链断裂，在修复的过程中实现DNA序列的改变。

? ? ? ? DNA修复机制分为两类：同源重组 (HDR) 和非同源末端连接 (NHEJ)。同源重组修复需要借助外源的修复模板，可以实现精确可控的编辑（例如精准的基因插入和替换）；NHEJ修复不依赖修复模板，直接将两个DNA末端拼接，但在拼接的过程中会产生碱基插入或缺失 (indels)，无法实现精确的编辑，非同源末端连接是一种易错易突变的修复途径，容易导致断裂位点插入或缺失数个碱基，从而引起目标基因移码突变或提前终止。

? ? ? ? ?随着研究的深入，CRISPR/Cas技术已经被广泛的应用。除了基因敲除，基因替换等基础编辑方式，它还可以被用于基因激活，疾病模型构建，甚至是基因治疗。如图展示了最基础的两种CRISPR/Cas9技术应用。

图1 CRISPR-Cas9技术应用

? ? ? ? 目前卡梅德生物已成功为众多科研客户构建获得大量目的细胞株。我们构建的细胞系可直接应用于下游的生物学研究，卡梅德生物建立了完善的细胞实验服务平台，提供一体化的工业生产式技术服务，与国内知名研发单位合作推出完备的CRISPR/Cas9载体系统，包括单敲除、双敲除、缺口酶、慢病毒敲除载体和敲除载体库等体系，并且每一个载体系统都有不同的标签（EGFP/RFP/Puro/Neo）可供选择，能够为客户提供快速、准确的基因敲除项目服务。卡梅德生物依托先进的技术和经验丰富的科研团队，可为客户提供系统的CRISPR/Cas9敲除细胞系构建服务。详情可咨询卡梅德生物官网获得更多知识分享。