卡梅德生物的小编辑介绍:
? ? ? ? 昆虫杆状病毒表达系统是生物制备领域中一种强大的工具,通过利用昆虫宿主中杆状病毒的表达系统,实现了高效、选择性地合成外源蛋白。
? ? ? ? 昆虫杆状病毒(Baculovirus)表达系统是一种广泛应用于昆虫宿主细胞的异位蛋白表达系统。该系统最常用的是Autographa californica多角体病毒(AcMNPV),该病毒对多种昆虫细胞具有高度感染性,为高效表达外源基因提供了理想的平台。
1、昆虫杆状病毒表达系统原理及流程:
①、表达载体构建:将目标基因插入昆虫杆状病毒表达载体中,通常是线性或环状的DNA质粒。载体还包括与病毒自身基因组不同的选择标记,如胞嘧啶鸟嘌呤磷酸转移酶(DHFR)基因。
②、转染昆虫宿主细胞:将构建好的表达载体通过转染或感染方式引入昆虫宿主细胞,使目标基因被插入宿主细胞的染色体中。
③、表达和复制:目标基因被宿主细胞启动转录和翻译,产生大量的目标蛋白。与此同时,杆状病毒的DNA也会复制,形成新的病毒颗粒。
④、蛋白包装和释放:合成的目标蛋白通常具有与天然蛋白相似的后翻译修饰,然后被包装到新生病毒颗粒中。最终,病毒颗粒释放到培养基中,可以通过收获和纯化获得目标蛋白。
2、昆虫杆状病毒表达系统方法
①、转染方法:包括钙磷沉淀法、电穿孔法等,通过将表达载体引入细胞,实现目标基因的表达。
②、感染方法:直接使用杆状病毒颗粒感染昆虫细胞,比转染方法更常用于大规模蛋白表达。
③、选择标记的利用:利用表达载体中的选择标记,例如DHFR基因,通过选择性培养,筛选出表达目标基因的细胞株。
3、昆虫杆状病毒表达系统注意事项
①、选择合适的表达载体:根据目标蛋白的性质选择合适的表达载体,确保表达载体与目标基因相容。
②、优化感染条件:针对不同的昆虫细胞系,需要优化感染的条件,包括感染时间、MOI(Multiplicity of Infection)等参数。
③、合理设计实验:考虑到杆状病毒表达系统的复杂性,需要合理设计实验,包括对照组的设置、时间点的选择等。
? ? ? ? 昆虫杆状病毒表达系统以其高效和对蛋白质天然修饰的优势,成为许多生物学和生物制备领域中研究和应用的首选。通过充分了解其原理、流程和操作技巧,研究人员能够更好地利用这一表达系统进行外源蛋白的高效合成。