【卡梅德生物】通过单B细胞技术制备兔单抗出现的问题及如何解决?

发布时间:2024年01月18日

? ? ? ? ?在制备兔单抗的过程中,可能会遇到一些常见问题,以下是一些可能的问题和相应的解决方法:

1.兔单抗的特异性不足是什么导致的?

? ? ? ?抗体如果发生了与非目标蛋白的结合,那么可能导致抗体的特异性不足。发生这种情况可以重新评估抗原选择,优化抗原的纯度和质量,调整免疫方案以提高特异性[1]。

2.用流式可以一次分选多少个抗原特异性的单个B细胞?

? ? ? ? 目前,FACS法的通量是一天可以分选10板抗原特异性的单B细胞。

3.抗体的产量低该怎么办?

? ? ? ? 如出现抗体产量低的情况,可以调整免疫方案,适当增加免疫次数,也可以使用强化的免疫佐剂。

4.抗体亲和力低怎么办?

? ? ? ?如出现抗体亲和力低的情况,可以调整免疫方案,重新评估抗原选择,也可以通过亲和纯化步骤来提高亲和力

5.FACS分选单B细胞,除特异性抗原标记外,还需要其他什么surface marker染色?

? ? ? ? 小鼠B细胞可以用CD19作为表面marker,然后通过IgG阳性,IgM阴性来分选单细胞。兔子B细胞的表面marker目前信息比较少,分选的时候可以先根据物理参数,比如大小、颗粒度进行分选,然后再根据IgG阳性IgM阴性以及抗原特异性上进行分选[2]。

6.培养的记忆B细胞可以分泌抗体吗?需要先增殖后分化成浆细胞吗?

? ? ? ? 是的,记忆B细胞需要分化成终端的浆细胞,才能分泌抗体[3]。

7.用单个B细胞技术制备抗体,记忆B细胞和浆细胞哪种细胞更有优势?

? ? ? ?两种细胞各有优势,记忆B细胞抗体基因拷贝数较低但在B细胞中的比例比浆细胞高。浆细胞在B细胞中的比例很低,但每个细胞含有抗体基因的拷贝数相对较高。

? ? ? ?卡梅德生物单B细胞单抗制备(single b)基于流式细胞分选技术,利用每个B细胞只产生一种特异性抗体的特性,直接从单个B细胞中扩增出抗体基因,通过重组表达获得特异性抗体。基于单B细胞技术,可以在完成动物免疫后直接从外周血中获取阳性B细胞并克隆抗体基因序列,得到的兔单克隆抗体具有高特异性、高活性和高亲和力等突出优势。为了满足客户的不同需求,卡梅德生物能够提供从抗原设计,合成与修饰,到动物免疫,单B细胞富集筛选,表达与纯化,功能验证等一站式技术服务。更多详情可咨询卡梅德生物官网获得详细内容:

https://www.kmdbioscience.cn/pages/tudanBxibaodankangzhibeifuwu.html

参考文献

[1]Gross A, Schoendube J, Zimmermann S, et al. Technologies for Single-Cell Isolation. Int J Mol Sci. 2015;16(8):16897-16919.

[2][2] Wallace J L , Arfors K E , Mcknight G W .A monoclonal antibody against the CD18 leukocyte adhesion molecule prevents indomethacin-induced gastric damage in the rabbit[J].Gastroenterology, 1991, 100(4):878-883.DOI:10.1016/0016-5085(91)90259-N.

[3] Powell, William C ,Hicks,et al.A new rabbit monoclonal antibody (4B5) for the immunohistochemical (IHC) determination of the HER2 status in breast cancer: comparison with CB11, fluorescence in situ hybridization (FISH), and interlaboratory reproducibility.[J].Appl Immunohistochem Mol Morphol, 2008,15(5):510-1. DOI:10.1097/PAI.0b013e31802ced25.

文章来源:https://blog.csdn.net/g20231908/article/details/135666170
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