动物免疫（羊驼免疫）-泰克生物

在过去几十年里，抗体研究和应用的领域已经经历了革命性的变化。在这个进程中，一种特殊来源的抗体 —— 来自骆驼科动物（包括羊驼）的单链抗体（也称纳米抗体）引起了全球科学家的广泛关注。

羊驼等骆驼科动物的免疫系统具有独特性，它们产生的抗体除了具有常规的重链和轻链外，还能产生只有重链的抗体。这些只有重链的抗体在功能上与常规抗体相似，却具有尺寸小、耐高温和稳定性强、以及组织穿透能力强等优势，正是由于这些特性，使得纳米抗体在生物医药、科研、诊断以及其他多个领域突显出巨大的潜力。随着生物医学研究的不断深入，纳米抗体因其独特的生物物理属性和广泛的应用潜力而成为市场的热点。

一、选择羊驼免疫的原因和优势：

1、生物物理属性：羊驼纳米抗体的尺寸小能够到达传统抗体难以触及的细胞内部和组织深处，并且羊驼纳米抗体在极端的温度和pH值下展现出优异的稳定性，具有高水溶性，且适合多种应用场景，使其成为许多传统抗体无法胜任的应用的理想选择。

2、易于工程化和生产：纳米抗体的简单结构使其更容易进行工程化改造，包括人源化、多价性构建等，并且可以在细菌或酵母系统中高效表达，降低生产成本。

3、高特异性和高亲和力：羊驼的免疫系统能够产生对特定抗原有高度特异性和亲和力的抗体，这对于疗法和诊断开发至关重要。

二、羊驼免疫流程：

1、预筛选和准备：

①、动物选择：从健康群体中选择适龄、体格健康的羊驼，需要对其进行血液检查和疾病筛查，确保没有感染性疾病或其他健康问题。

②、免疫原准备：免疫原是诱发免疫反应的关键，需要根据目标抗体的需求选择合适的蛋白、多肽或其他合适的物质。

2、免疫、采血和分离血清：

①、根据我们准备好的免疫原，按照免疫流程表给羊驼进行免疫。每一次免疫的时间一般间隔十四天。

②、在免疫前采集阴性血清，在四免、五免后一周进行采血用于免疫效价检测（采集的血液离心10min，分离保存上层血清）。通过ELISA、Western blotting或其他免疫分析方法检测特异性抗体和滴度。

3、融合和克隆（如果需要单克隆抗体）：

①、从羊驼获取B淋巴细胞并与骨髓瘤细胞融合，产生杂交瘤细胞。

②、对杂交瘤细胞进行筛选，寻找产生所需特异性抗体的克隆。

4、抗体生产和纯化：

通过体外培养杂交瘤细胞或者利用重组DNA技术在微生物、哺乳动物细胞或其他系统中生产抗体。使用蛋白A/G柱或特异性亲和层析等方法纯化抗体。

5、质量控制：对最终产品进行质量检查，包括纯度、特异性、亲和力以及生物活性等测试。

6、产品交付：提供所需的文件和产品规格，将纯化的抗体交付给客户。

此外，免疫方案、佐剂的选择、免疫时间表、免疫原剂量等都需要根据特定的项目需求进行定制。泰克生物在接收客户免疫抗原且通过QC验证后，交付给客户设计好的免疫计划表，包括采血计划、血清效价ELISA检测计划，动物免疫剂量，采血分离PBMC计划等内容。

三、对各类免疫原的要求：

蛋白质和多肽： 需要高纯度，正确的构象，并且具有足够的免疫原性以诱导强烈的免疫反应。

小分子： 通常需要与载体蛋白偶联以增加免疫原性，并明确指出偶联位点以便正确识别特异性表位。

复杂样本（如细胞、病毒）： 需要充分的表征确保其完整性和活性，以及安全性评估。

四、如何获得高效价血清及后续筛选获得高亲和力抗体的免疫技术：

1、高质量的免疫原准备：

①、免疫原的纯度应尽可能高，以避免非特异性反应。

②、对于蛋白质免疫原，确保其在三维结构上保持完整，以便更好地模拟天然情况下的抗原表位。

③、如果目标是表面抗原或受体，考虑使用全长、复杂或表达在适当表达系统中的重组蛋白。

2、佐剂的选择和使用：

①、使用能够增强长期免疫记忆和刺激较高抗体滴度产生的佐剂，如弗氏完全或不完全佐剂、水合氢氧化铝等。

②、某些情况下，为了进一步增强免疫反应，可在佐剂中添加特定的免疫刺激复合物（如CpG寡核苷酸）。

3、免疫方案的设计：

①、制定合理的免疫时间表，包括基础免疫、多次加强免疫，并在每次免疫后给予足够的时间，让免疫系统充分反应。

②、适时采血，监测抗体水平，以决定是否需要额外的加强免疫或调整免疫方案。

4、血清筛选和抗体的亲和力成熟：

①、使用ELISA、免疫印迹（Western blotting）或免疫沉淀等方法，筛选高效价血清样本。

②、对于需要生成单克隆抗体的情况，可以从免疫的羊驼中分离B细胞，进行单细胞筛选，然后利用分子生物学方法（如PCR、质粒构建等）将特定的抗体基因克隆出来。

③、在需要的情况下，可以通过体外亲和力成熟技术（例如，基于噬菌体或酵母的显示技术）来增强所得抗体的亲和力。

5、高亲和力抗体的生产和验证：

①、使用合适的表达系统（如哺乳动物细胞、大肠杆菌等）来生产重组抗体。

②、纯化抗体并进行全面的生物学功能和结合特性分析，确保其具有预期的高亲和力和特异性。