? ? ?? 原核表达载体:能携带外源的目的基因进入原核细胞中,进行表达的载体。枯草芽孢杆菌表达载体、大肠杆菌表达载体和链霉菌表达载体是主要的三大原核表达载体。其中以大肠杆菌表达载体应用最广泛、发展得最成熟。主要原因是,大肠杆菌遗传背景清楚,目的基因表达水平高,培养周期短,抗污染能力强。
? ? ? 大肠杆菌表达系统主要包括:宿主菌(即大肠杆菌)及表达载体。表达载体是在克隆载体的基础上,增加一些表达元件。除了具备复制能力、具有合适的酶切位点以及筛选标记外,还能够将外源目的基因引入到大肠杆菌中,并进行表达。
? ? ? ? 表达载体具有以下特征:①稳定的遗传复制能力,在无选择压力下能稳定地存在于大肠杆菌内;②具有显性的筛选标记;③启动子的转录水平是可以调控的,未激活时本底转录水平较低;④启动子所转录的mRNA能够在适当的位置终止,转录过程不会影响表达载体的复制;⑤具备适用于外源基因插人的酶切位点。
? ? ? ? 综上,原核蛋白表达载体质粒包括复制子(Replicon)、启动子(promoter)、筛选标签(selection marker)、终止子和核糖体结合位点多克隆位点(MCS)和融合蛋白移除策略(fusion tag removal strategy),常见的原核表达载体pET-28a(+)、pGEX-4T-1、pET SUMO。