Jackson—Anti-Human IgE Antibodies

Jackson?lmmunoResearch推出一系列适用于诊断试剂研发的Mouse Monoclonal Anti-Human IgE antibodies（小鼠抗人IgE单克隆抗体），补充了Jackson现有的抗人lgG、IgM和lgA抗体产品，抗人IgE可与一系列特定的报告分子偶联（如碱性磷酸酶和生物素），使其具有极强的灵敏度。

Jackson?ImmunResearch Anti-Human IgE

Jackson ImmunoResearch可提供两个不同克隆号（ME.114和ME.10A10）的抗人IgE抗体，均为小鼠来源的单克隆抗体，与人lgE反应，并且是ε链特异的。

小鼠抗人IgE（Clone: ME.114, Cat#209-002-241）可与一系列报告分子偶联，并可在多种实验应用中检测人IgE，如ELISA、侧向免疫层析、流式细胞术、WB和化学发光免疫分析（CLIA）。

小鼠抗人IgE（Clone: ME.10A10，Cat#209-002-244）是未标记的纯化抗体，在夹心法检测中可作为捕获抗体与标记的抗人IgE抗体（Clone: ME.114）配对使用。

如需购买Jackson?lmmunoResearch公司的产品，或咨询产品技术问题，请联系代理商欣博盛生物。

产品信息

标记类型	产品名称	产品货号	规格
Unconjugated	IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114)	209-002-241	0.1 mg
	IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (10A10)	209-002-244	0.1 mg
Horseradish Peroxidase	Peroxidase IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114)	209-032-241	0.5 ml
Alkaline Phosphatase	Alkaline Phosphatase IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114)	209-052-241	0.5 ml
Biotin-SP (long spacer)	Biotin-SP (long spacer) IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114)	209-062-241	0.25 ml
Fluorescein (FITC)	Fluorescein (FITC) IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114)	209-092-241	0.25 mg
R-Phycoerythrin	R-Phycoerythrin IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114)	209-112-241	0.1 ml
40 nm Colloidal Gold	40 nm Colloidal Gold IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114)	209-402-241	1 ml

特异性

Jackson ImmunoResearch抗人IgE?ε链特异性抗体已通过ELISA测试，结果显示该抗体对人IgG、IgM或IgA具有最小的交叉反应性。图1为验证抗人IgE抗体（Clone: ME.114和ME.10A10）特异性的WB结果图，结果显示未检测到其他类型的免疫球蛋白信号。Jackson未测试是否可以检测到其他物种的免疫球蛋白。

图1.?

A.?直接蛋白印迹显示Anti-Human IgE antibody(ME.114)对人IgE的特异性。每孔分别上样2ug纯化的人免疫球蛋白（IgE、IgG、IgA和IgM）。SDS-PAGE在非还原条件下进行，并将蛋白质印迹到硝化纤维素膜上。用含5%BSA的PBS/T封闭，并用HRP标记的Anti-Human IgE（Cat#209-032-241）以1:10000稀释孵育，使用ECL显色。

B.?间接蛋白印迹显示Anti-Human IgE antibody (10A10)抗人IgE（Clone: ME.10A10）对人IgE的特异性。每孔分别上样250ng纯化的人免疫球蛋白（IgE、IgG、IgA和IgM）。SDS-PAGE在非还原条件下进行，并将蛋白质印迹到硝化纤维素膜上。用含5%BSA的PBS/T封闭，2ug/mL的Anti-Human IgE（Cat#209-002-244）孵育。PBS/T洗涤后，用HRP标记的抗小鼠IgG（Cat#715-035-150）以1:10000稀释孵育，使用ECL显色。

图2.?

A.?在还原和非还原条件下使用Anti-Human IgE (clone number ME.114)检测100ng纯化人IgE的WB结果。

B.?在还原和非还原条件下使用Anti-Human IgE (clone number 10A10)检测100ng纯化人IgE的WB结果。

注：抗人IgE（Clone: ME.114）和抗人IgE（Clone: ME.10A10）对还原IgE表现出较弱的信号，因此不建议两者用于检测还原IgE。

灵敏度

Jackson ImmunoResearch /欣博盛生物 抗人IgE抗体检测各种来源的人IgE均具有优异的灵敏度。图3展示了Anti-Human IgE (clone number ME.114)在间接ELISA中检测两种不同浓度IgE包被板的灵敏度。图4展示了Anti-Human IgE（Clone: ME.114）在间接ELISA中检测不同骨髓瘤和血浆来源纯化IgE的灵敏度。

图3：间接法ELISA检测人IgE。每孔加入100ul含2或0.2ug/ml的人血浆中纯化的IgE的碳酸盐包被缓冲液进行包被，4℃过夜。每孔加入300ul含1%BSA（Cat#001-000-161，不含IgG、蛋白酶）的PBS/T封闭2小时。用PBS/T将一抗Anti-Human IgE（Cat#209-002-244）以1:3在板上连续稀释，并在室温下孵育2小时。二抗Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG, Fcγ fragment specific (min X Hu, Bov, Hrs Sr Prot)（Cat#115-035-071），用PBS/T中以1:20000稀释，孵育1.5小时。加入TMB 30分钟后在620nm处读数。

图4：间接法ELISA检测不同来源的人IgE。每孔加入100ul含2ug/ml纯化人IgE的碳酸盐包被缓冲液进行包被，4℃过夜。每孔加入300ul含1%BSA（Cat#001-000-161）的PBS/T在室温下封闭2小时。用PBS/T将一抗Anti-Human IgE（Cat#209-002-241）以1:3在板上连续稀释，并在室温下孵育1小时。二抗Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG, Fcγ fragment specific (min X Hu, Bov, Hrs Sr Prot)（Cat#115-035-071）以1:20000稀释，孵育1.5小时。加入TMB 30分钟后在620nm处读数。?

检测血浆中IgE

Jackson ImmunoResearch抗人IgE与其配对的捕获抗体配合用于夹心法ELISA时具有极好的灵敏度。两种不同的单克隆抗体可以配对使用以进行捕获和检测。在这种情况下，用牛血清白蛋白（Cat#001-000-161，不含IgG与蛋白酶）封闭前，使用未标记的Anti-Human IgE（Clone: ME.10A10，Cat#209-002-244）作为包被抗体，洗涤后，与稀释后的样品一起孵育。选择标记的Anti-Human IgE antibody，例如Alkaline Phosphatase Anti-Human IgE (Cat#209-052-241)，或者Peroxidase Anti-Human IgE (Cat#209-032-241)，接着使用合适的底物或显色技术。图5展示了直接夹心法ELISA验证非偶联的抗人IgE与碱性磷酸酶标记的检测抗体搭配使用来定量检测患者样本中的总IgE。本实验中使用样本的总IgE（kIU/l）已通过罗氏Cobas Total IgE assay检测（结果详见图5的X轴）。

?

图5.?直接夹心法ELISA检测人血清和血浆样品中的总IgE。用2ug/ml未标记的Anti-Human IgE（Clone: ME.10A10，Cat#209-002-244）包板，100μl/孔，4℃过夜。每孔加入300ul含1%BSA（Cat#001-000-161）的PBS/T（0.05%吐温）封闭1.5小时，随后加入用PBS/T以1:80稀释的样品孵育1小时，100ul/孔。检测抗体，碱性磷酸酶偶联的抗人IgE（Cat#209-055-241），用PBS/T中以1:10000稀释，100ul/孔孵育1小时。每孔加入100ul 新鲜配制的DEA底物孵育30分钟，在405nm处读数。

推荐稀释倍数

下表中的建议稀释倍数用范围表示，因为最佳的稀释度与许多因素有关，如抗原密度，渗透性等。使用者应根据自己的实验来确定抗体最佳的工作浓度。

Conjugate	ELISA	Weatern Blot*	Flow Cytometry
Uncojugated		10-20 ug/ml
FITC		1:50—1:200
R-PE			1:50—1:200
Horseradish Peroxidase	1:5,000—1:100,000	1:5,000—1:100,000 (non-ECL) 1:10,000—1:200,000 (ECL)
Alkaline Phosphatase	1:5,000—1:50,000	1:5,000—1:50,000
Biotin-SP(using Fluorphore-Conjugates Streptavidin)			1:200—1:1,000
Biotin-SP(using enzyme-Conjugates Streptavidin)	1:20,000—1:400,000	1:20,000—1:400,000

*请注意，当检测还原性蛋白质时，该抗体将给出较弱的信号，因此不建议用于需要通过蛋白质印迹检测还原IgE的应用。

参考文献

1.?Cox, L., Larenas-Linnemann, D., Lockey, R. and Passalacqua, G., 2010. Speaking the same language: The World Allergy Organization Subcutaneous Immunotherapy Systemic Reaction Grading System. Journal of Allergy and Clinical Immunology, 125(3), pp.569-574.e7.

2.?Pawankar, R., Canonica, G., Holgate, S., and Lockey, R., 2011. World Allergy Organization (WAO) white book on allergy. United Kingdom: WAO.

3.?Sánchez-Borges, M., Ansotegui, I. & Cox, L. World Allergy Organization Grading System for Systemic Allergic Reactions: it Is Time to Speak the Same Language When it Comes to Allergic Reactions. Curr Treat Options Allergy 6, 388–395 (2019). https://doi.org/10.1007/s40521-019-00229-8.