在免疫组化检测过程中,许多样本组织会产生可通过各种波长滤光片的组织内源性自发荧光,干扰抗体标记的目的蛋白荧光的观察,甚至导致实验失败。为了解决免疫组化实验中的自发荧光,VectorLabs公司(国内代理商欣博盛生物)专门开发了一款Vector??True VIEW? Autofluorescence Quenching Kit试剂盒,该产品旨在去除组织切片中由于醛固定、红细胞以及胶原蛋白/弹性蛋白结构造成的自发荧光。该试剂使用方便,无需稀释操作,为即用型试剂。?该试剂盒中含有防自发荧光效果excellent的VECTASHIELD Vibrance Antifade Mounting Media 封片剂(含或不含DAPI两种)。客户无需单独购买封片剂,经济、实用。
注意:该试剂盒对脂褐素造成的组织自发荧光无效。
● 试剂盒组成:?
a. Vector?TrueVIEW? Reagent A 5ml?b. Vector?TrueVIEW? Reagent B 5ml?c. Vector?TrueVIEW? Reagent C 5ml?d. VECTASHIELD Vibrance Antifade Mounting Media 2ml?e. VECTASHIELD Vibrance Antifade? Mounting Media with DAPI 2ml
其中,货号SP-8400包含a,b,c,d四个组分;货号SP-8500包含a,b,c,e四个组分
●?产品使用方法:
将ReagentA、B、C以1:1:1的比例混合。(注意混合顺序,先将A和B以1:1比例混合10s,再加入C,混匀10s) | ||
将混好后的TrueView试剂滴加到组织样本切片上,将样本完全覆盖,孵育2-5min | ||
使用PBS缓冲液洗片5次,除去多余缓冲液,VECTASHIELD?Vibrance Media封片后观察 |
●?产品特征?
A 显著降低背景染色并保留特异性抗原染色;?B 提高信噪比;?C 产品稳定,储存在滴瓶中,使用方便;?D 操作简单,快速;整个染色过程仅需2-5min;?E 为使用者提供清晰、明确、真实的染色结果;?F 适用于多种荧光染料的自发荧光去除,包括Alexa488,Alexa 594,DyLight 488,DyLight 594,FITC,Cyanine 5和GFP;
G SP-8500试剂盒中的封片剂中DAPI浓度较高,可对细胞核进行清晰的染色。
●?产品对自发荧光淬灭效果:
◆?右图为经Vector?TrueVIEW?kit处理后,人肾脏组织切片中自发荧光淬灭的百分比与处理时间之间的关系。?◆?Note:2分钟内即可达到最大淬灭效果。 |
●?产品应用举例:??
> 案例一
未经任何处理 | 使用Vector?TrueVIEW?处理 |
◆ 上图为人脾脏组织染色结果:使用VectaFluor TM Duet试剂盒(DK-8818)检测的mouse anti-CD20(red)和rabbit anti-Ki67(green)对人脾组织切片的染色。?◆?左图为未经任何处理的染色结果,?◆?右图为使用TrueVIEW?Autofluorescence Quenching试剂盒染色结果。于未经处理的染色结果相比,经TrueVIEW?Autofluorescence Quenching试剂盒处理后,自发荧光显著减少。 |
>?案例二
◆?A-D图为人肾脏切片(石蜡切片)染色结果,实验中使用anti-AE1 /AE3抗体对角蛋白进行染色(绿色)。◆?A图未经处理,?◆?B-D图经TrueVIEW?Quencher Kit处理。自发荧光明显减弱。延长曝光时间,阳性信号强度也随之增强。 | ||
>?案例三
未经任何处理 | 使用TrueVIEW Treatment Mounted with Vibrance + 3x DAPI处理 |
◆?上图为人胰腺组织染色结果:绿色为insulin的染色。 ◆?左图为未经任何处理的染色结果, ◆?右图为使用TrueVIEW Treatment Mounted with Vibrance + 3x DAPI(SP-8500)试剂盒染色结果。与未经处理的染色结果相比,经该试剂盒处理后,自发荧光显著减少,核染色显著增强。 |
>?案例四
未经处理(内源性自发荧光)?? | 经TrueVIEW?Quencher Kit处理 |
Company A | Company B | Company C |
Copper Sulfate Solution | Sodium Borohydride | Sudan Black B |
●?产品订购信息?Vector??True VIEW? Autofluorescence Quenching Kit
产品 | 货号 | 规格 | 染色切片数 |
Vector??True VIEW?Autofluorescence Quenching Kit | SP-8400 | 15ml | 100-150 |
Vector??True VIEW?Autofluorescence Quenching Kit | SP-8500 | 15ml | 100-150 |
VECTOR TrueVIEW?? Autofluorescence Quenching Kit (3ml) | SP-8403 | 3ml | ~30 |
VECTASHIELD??HardSet?Antifade Mounting Medium | H-1400 | 10ml | 100-150 |
VECTASHIELD??HardSet?with DPI Antifade Mounting Medium | H-1500 | 10ml | 100-150 |